PCR是有效控制疾病的方法,并且在水产养殖当中,得到广泛的应用。
PCR是一种有效的鱼虾病诊断技术。
一、什么是PCR?
PCR(聚合酶链式反应)是一种分子生物学技术,用于“扩增”生物体的DNA分子或者DNA分子片段,将初始DNA数量增加到所需的任意量,产生数千至数百万个特定DNA序列,最终可以进行比对。
PCR技术由Kary Mullis于1983年开发,是生物和医学研究实验室的常用技术。比如:遗传病和传染病的鉴别、血统测定、DNA测序等都可以使用PCR技术。
当PCR过程发生时,从原始模具DNA中产生的新DNA将继续用作模具,以合成下一个DNA分子,形成DNA样本呈指数放大的连锁反应链。PCR方法基于热循环,使用携带与目标DNA序列互补的序列的引物(它是一小段DNA)。
二、PCR的组成部分
PCR需要很多成分。那是:
样品:DNA包含要扩增的DN**段。
引物:携带与待扩增DNA序列互补的序列。
DNA聚合酶:催化DNA的**。
核苷酸:作为DNA聚合物酶的原料,以建立新的DNA。
缓冲溶液:为DNA聚合酶提供有利的环境。
三、PCR的原理
第一步:变形,使用热量打破2条DNA链之间的桥,将双链DNA分离成单链。
第二步:装上诱饵,根据添加原理(低温),将引物附着在刚刚分离的DNA单链上。
第三步:拉伸,DNA聚合酶附着在空链上,构建新的DNA。
这样,经过变性、装上诱饵和拉伸,DNA含量就能够实现增加一倍的目的。
四、PCR的常见类型?
RT-PCR(反转录PCR):是一种将RNA的反转录酶(逆转录)结合成cDNA和特定DNA靶标的扩增的技术,达到扩增合成目的片段。主要用于临床研究和实验中的特异性RNA定量、基因表达分析和病毒RNA定量。
Nested-PCR(巢式聚合酶连锁反应):一种改进的PCR技术,目的是在存在杂质时,在不需要的引物连接到DNA链的情况下,减少PCR结果出现错误。使用2组引物:引物1将与DNA配对以合成新链。引物2将与新合成的链(第一个PCRsp)配对,以根据需要合成新链。该技术将检测病原体的存在,即使数量非常少,也可以检测出来。
LAMP-PCR(环介导等温扩增):基于将4种类型的引物配对到目标基因上的6个特定位置进行工作。结果是包含多个具有不同靶标和大小的DNA序列的双链DNA的混合物。这种方法非常简单且便宜。阳性结果基于对Mg-吡啶磷酸盐的沉淀反应,将在紫外线下发光。
Real time PCR(实时PCR):一边放大DNA的数量,一边发现和知道疾病的程度(取决于样本中或多或少的DNA数量)。该方法使用荧光染料来确定示踪剂的强度,从而预测样品中DNA的量。
Multiplex PCR(多重PCR):由于使用多对诱饵,每对诱饵对应于一段特异性基因,对应致病物的多个DNA的一次合成反应。这种方法的优点是它减少了仅使用一对引物时确定目标 DNA 链的时间。
五、水产养殖中,PCR可以检测出什么疾病?
当养殖动物以高密度扩大时,任何动物(不仅是虾和鱼),都将非常容易感染病原体。因此,将PCR技术应用于对虾疾病的诊断,是有效控制和管理疾病的有效方法。
鱼虾中的许多疾病可通过PCR快速诊断:
1、虾白斑病(WSSV)
2、虾急性肝胰腺坏死病(AHPND/EMS)
3、肝孢子虫病 (EHP)
4、桃拉综合征病毒 (TSV)
5、虾黄头病 (YHV)
6、传染性肌肉坏死病毒(IMNV)
7、传染性皮下和造血器官坏死病 (IHHNV)
8、虾发光病(哈维弧菌)
9、坏死性肝胰腺炎细菌 (NHPB)
10、锦鲤病毒病:锦鲤疱疹病毒 (KHV)
11、罗非鱼细菌性疾病:弗朗西斯氏菌(FLB)。